Identificação de romance, terapia

Scientific Reports volume 5, Número do artigo: 17014 (2015) Citar este artigo

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Uma retificação a este artigo foi publicada em 19 de dezembro de 2016

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Atualmente, existe uma necessidade urgente de biomarcadores que possam ser usados ​​para monitorar a eficácia de terapias experimentais para a Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) em ensaios clínicos. A identificação de novos biomarcadores de proteínas tem sido limitada devido à enorme complexidade do proteoma sérico e à presença de um pequeno número de proteínas altamente abundantes. Aqui, utilizamos uma abordagem proteômica baseada em aptâmeros para traçar o perfil de 1.129 proteínas no soro de camundongos de tipo selvagem e mdx (deficiente em distrofina). Os níveis séricos de 96 proteínas foram significativamente alterados (P < 0,001, q < 0,01) em camundongos mdx. Além disso, o tratamento sistêmico com um conjugado peptídeo-oligonucleotídeo antisense projetado para induzir o salto do exon Dmd e recuperar a expressão da proteína distrofina fez com que muitas das proteínas séricas diferencialmente abundantes fossem restauradas para níveis de tipo selvagem. Os resultados para os cinco principais biomarcadores de proteínas candidatas (Pgam1, Tnni3, Camk2b, Cycs e Adamts5) foram validados por ELISA nas amostras de camundongos. Além disso, verificou-se que ADAMTS5 estava significativamente elevado no soro humano de pacientes com DMD. Este estudo identificou múltiplos novos biomarcadores de proteínas responsivas à terapia no soro do camundongo mdx com utilidade potencial em pacientes com DMD.

A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma doença monogênica letal e a miopatia hereditária mais prevalente que afeta crianças. Embora atualmente incurável, muitas estratégias terapêuticas para DMD foram propostas. Uma abordagem altamente promissora é o salto de exon mediado por oligonucleotídeo antisense, que visa modular o splicing do gene da distrofina (humano: DMD, camundongo: Dmd) de modo a restaurar o quadro de leitura da tradução que é interrompido por mutações associadas ao DMD. Desenvolvemos uma tecnologia de salto de exon de segunda geração chamada PPMO (peptídeo-fosforodiamidato morfolino oligonucleotídeo) que induz salto de exon e restauração de distrofina em níveis elevados no músculo esquelético e diafragma e em níveis moderados no coração1,2. Ensaios clínicos com compostos de salto de exon de primeira geração (RNA 2'-O-metil e química de PMO nu) demonstraram promessa3,4 e alguma decepção5. Uma das dificuldades em avaliar a eficácia dessas terapias experimentais tem sido encontrar medidas apropriadas de resultados de benefício clínico.

Os métodos para avaliar a restauração da proteína distrofina em pacientes tratados são atualmente restritos a análises de biópsias musculares (por exemplo, western blot e microscopia de imunofluorescência). Conceitualmente, a utilidade das biópsias musculares é limitada, uma vez que apenas uma pequena fração de um único músculo é analisada, usando apenas medidas semiquantitativas. A biópsia muscular também é altamente invasiva e dolorosa para os pacientes, o que significa que medições em série não são eticamente permissíveis ou práticas. Da mesma forma, o teste de caminhada de seis minutos, no qual a distância percorrida por um paciente em 6 minutos é registrada antes e após o tratamento6, também tem limitações, incluindo alta variabilidade entre pacientes e uma relação pouco clara com a história natural da doença. A utilidade deste teste também pode ser limitada pela adesão do paciente ao protocolo. Além disso, alguns pacientes perdem a deambulação pela evolução natural da doença, impossibilitando a realização do exame. Uma abordagem alternativa tem sido usar um painel de medidas de resultados funcionais, como o protocolo North Star Ambulatory Assessment (NSAA)7. No entanto, o NSAA também é aplicável apenas a pacientes ambulatoriais, excluindo, assim, os pacientes com manifestação mais grave da doença.

A ressonância magnética (MRI) é outro método de monitoramento da patologia na DMD, revelando a extensão da degeneração muscular (ou seja, perda de massa muscular, fibrose e deposição de tecido adiposo), mas não fornece uma leitura direta da função muscular per se. Além disso, esta abordagem está sujeita a várias limitações, como alto custo, baixo rendimento e necessidade de pessoal especializado treinado na interpretação dos dados de ressonância magnética. A ressonância magnética é, portanto, menos adequada para uso em ensaios com grandes coortes de pacientes do que a análise de química clínica.