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IMUNOTERAPIA

Leucemia (2023) Citar este artigo

7 Altmétrica

Detalhes das métricas

No transplante haploidêntico de HLA, as células T reguladoras (Tregs) co-infundidas com as células T convencionais (Tcons), protegem contra a doença do enxerto contra o hospedeiro (GvHD), mantendo o efeito do enxerto contra a leucemia (GvL) [1,2,3] . A prevenção de GvHD pode ser devida à regulação negativa dependente de CTLA-4 de CD80/CD86 em células dendríticas (DCs) [4] enquanto o efeito GvL pode estar ligado à capacidade de Tregs de reduzir a expansão de células T, mas não sua ativação [ 5]. Aqui, descrevemos a localização seletiva das Tregs CD161+ na medula óssea de pacientes transplantados. Essa população, já descrita como capaz de produzir citocinas pró-inflamatórias [6], pode ser fundamental para o desenvolvimento de um microambiente capaz de manter um efeito GvL. 20 pacientes foram recrutados (métodos complementares) e receberam um haplo-HSCT com 2 × 106/kg Tregs, 1 × 106/kg Tcons e uma megadose de células CD34+ [1,2,3]. Amostras de sangue periférico (PB) e medula óssea (BM) foram coletadas em 1, 3, 6 e 12 meses após o transplante.

BM- e PB-DCs foram analisados ​​no BD FACS Lyric System (BD Biosciences, La Jolla, CA), usando os anticorpos listados na Tabela Suplementar 1. DCs foram classificados usando anti-CD123 (para DCs plasmocitóides, pDCs) e anti- CD11c Abs (para DCs mielóides, mDCs) (Tabela Complementar 1) e analisados, por RT-PCR em tempo real, para a expressão de Indoleamina 2,3-Dioxigenase 1 (IDO-1), Interleucina (IL)-6, IL -10, Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1) e Fator de Crescimento Transformador Beta 1 (TGFB1) (Tabela Complementar 2). DCs BM- e PB-CD11c+ foram coletadas de pacientes e co-cultivadas com células CD3+ autólogas. Para gerar Tregs CD161+, as células foram purificadas de PB de doadores saudáveis ​​(HDs), cultivadas com IL-2, IL-6 e TGF-β e usadas para ensaios funcionais (ver Métodos Suplementares).

O teste t de Student e a análise ANOVA foram realizados, seguidos pelo teste de comparações múltiplas de Tukey e Sidak. Todos os testes estatísticos foram avaliados em um nível α de 0,05, usando Stata, versão 13 (StataCorp, College Station, TX, EUA; RRID:SCR_012763) e software GraphPad Prism, versão 9 (RRID: SCR_002798, San Diego, CA, EUA) .

O resultado clínico dos pacientes inscritos (GvHD; taxa de recaída; TRM) estava de acordo com os dados publicados [3]. Todos os pacientes inscritos têm quimerismo total do doador. A análise por citometria de fluxo revelou que a porcentagem de mDCs foi significativamente maior nas amostras BM (intervalo: 0,16–2,03%) do que nas PB (intervalo 0–0,18%) no primeiro mês após o transplante (Fig. 1A). Os mDCs derivados de BM expressaram níveis mais altos do receptor coestimulador CD86 (intervalos MFI PB: 411–548; BM: 603–859) 12 meses após o transplante (Fig. 1B). Nenhuma diferença surgiu nos pDCs. A RT-PCR mostrou que, em PB-mDCs, a expressão de IL-6 e TGF-β diminuiu gradualmente após o transplante, enquanto permaneceu quase inalterada em BM-mDCs (Fig. 1C, D). Por causa disso, após doze meses do transplante, a secreção de IL-6 em PB-mDCs foi significativamente menor do que em BM-mDCs (Fig. 1C). Por outro lado, a expressão do regulador do ponto de verificação imunológico PD-L1 permaneceu extremamente alta em PB-mDCs, em comparação com BM-mDCs (Fig. 1E). Isso indica a presença de uma assinatura imunossupressora em PB-mDCs. A expressão das moléculas co-estimuladoras e dos checkpoints imunológicos foram semelhantes a Carenza et al. [7].

A A porcentagem de mDC foi maior em BM do que em PB, no primeiro mês após o transplante (*teste t de Student: p < 0,05). Os mDCs derivados de B BM expressaram níveis mais altos do receptor coestimulador CD86 (apresentados como valores de MFI), em comparação com os mDCs derivados de PB (**Teste t de Student: p < 0,01). C, D RT-PCR em tempo real mostrou a diminuição gradual da expressão de IL-6 e TGF-β, após o transplante, em PB-mDCs, enquanto seus níveis em BM-mDCs permanecem estáveis. (*Teste t de Student: p < 0,05). E RT-PCR em tempo real mostrou níveis de PD-L1 significativamente mais altos em PB-mDCs em comparação com BM-mDCs (*Teste t de Student: p < 0,05; ***Teste t de Student: p < 0,001). Todos os dados (A–E) são representados como média ± DP. F As porcentagens de células T CD3+, CD4+ e CD8+ foram comparáveis ​​(teste t de Student: p > 0,05) entre BM e PB e entre as fases inicial e tardia do seguimento (ANOVA: p > 0,05). Os dados são representados como média. G Painel Esquerdo. As células T CD8+ derivadas de BM exibiram uma expressão mais alta do receptor coestimulador CD28 do que as células T CD8+ derivadas de PB (30,3% ± 18,8 vs 9,2% ± 4,9; *Teste t de Student: p < 0,05). Os dados são representados como média ± DP. Painel Direito. A expressão do inibidor de checkpoint imunológico PD-1 foi significativamente maior em CD4+ derivado de PB (69% ± 29 vs 24% ± 11; *Teste t de Student: p <0,05) e CD8+ (65% ± 25 vs 4% ± 3; *Teste t de Student: p < 0,05) células T do que em linfócitos T derivados de BM. Os dados são representados como média ± DP. As co-culturas de H CD3+/CFSE+-mDCs mostraram uma taxa de proliferação de células T significativamente maior quando as células T foram cultivadas na presença de BM-mDCs (25% ± 7,2 vs 6,7% ± 8,7; *Teste t de Student: p < 0,05 ). Os dados são representados como média ± DP de 3 experimentos independentes.